“当飞利肝宁胶囊”抗炎及退黄的药效实验观察

 

张力群   谢娟^※  蔡昌化^Δ

 

摘  要

目的 在筛选抗急慢性肝炎的新药动物实验中，以” 当飞利肝宁胶囊”为对照药，观察其抗炎，退黄的机理。方法采用经典的大鼠足跖注射角叉菜胶所至炎性肿胀，大鼠皮下棉球肉芽肿增生，大鼠羧甲基纤维素囊中白细胞游出，二甲苯所至小鼠耳廓肿胀及耳毛细血管通透性增高，小鼠腹腔毛细血管通透性增加进行抗炎，抗渗出实验。ANZT大白鼠黄疸肝炎模型观察了”当飞利肝宁胶囊”清热解毒，活血化瘀的抗肝炎退黄效果。结果  “当飞利肝宁胶囊”对大鼠足跖注射角叉菜胶引起的炎性肿胀有明显抑制作用（P<0.001），对大鼠棉球肉芽肿的形成有显著的抑制作用（P<0.01），可使大鼠CMC囊中白细胞游出明显减少（P<0.001），明显抑制二甲苯所至耳廓肿胀的作用（P<0.05）及耳毛细血管通透性增高（P<0.001），明显抑制醋酸所至小鼠腹腔毛细血管通透性增加（P<0.05），对ANZT致大鼠黄疸肝炎的退黄效果（P<0.01）。结论 “当飞利肝宁胶囊”对急性炎症具有抗炎作用，可能对炎症的多个环节如体内的炎性介质释放，毛细血管通透性的增加，组织水肿胀及炎性渗出，以及炎症增殖期的肉芽组织增生均有抑制作用。对ANZT致大鼠黄疸肝炎的退黄效果表明： “当飞利肝宁胶囊”具有清热解毒和活血化瘀的双重药效。清热解毒是中医治疗急性感染性疾病的主要治法，由于感染，特别是局部感染发展到一定阶段常伴有血瘀证候。此时配伍活血化瘀法，常可大为提高疗效。这为当飞利肝宁胶囊用于慢性肝炎抗纤维化临床提供了药理依据。

主题词  抗炎症渗出  黄疸性肝炎  清热解毒  活血化瘀  “当飞利肝宁胶囊”

双重药效

四川美大康药业股份有限公司的当飞利肝宁胶囊以当药及水飞蓟为有效成分，有减轻肝细胞变性、抑制肝细胞炎症，稳定肝细胞膜的作用；在临床上表现为温和、平稳降低转氨酶且不易反弹的特点。鉴于水飞蓟降酶抗肝炎的效果早有定论，而抗慢性肝纤维化的效果与药物中有效成分及抗炎退黄效果有关。我们在筛选抗黄疸性肝炎药时，以“当飞利肝宁胶囊”为对照药进行实验，现将有关该药抗炎，退黄的观察结果报告如下。

1 材料

1.1动物：昆明种小鼠，ICR小鼠，wistdv大鼠，SD大鼠均由云南省实验动物中心提供。

1.2药物与试剂：“当飞利肝宁胶囊”、 实验前以蒸馏水配制成不同浓度的溶液，最后选定相当于临床用量50倍的剂量进行实验。a一萘异硫氟酸酯（ANZT）用其麻油溶液。其它药物试剂配制方法略。

2 方法与结果

2.1抗炎作用

2.1.1 对大鼠足跖注射角叉菜胶所致炎性肿胀的影响：取体重160克——180克雄性大鼠30只，随机分成3组，每组10只，分别为空白对照组，“当飞利肝宁胶囊”组和布洛芬阳性对照组，均OP给药。给药后1h，大鼠右后跖sc1%角叉菜0.1ml致炎。用大鼠足爪容积测定仪测定致炎前后不同时间大鼠足爪容积变化，每小时1次，连续5次。以致炎前后足爪容积的差值作为肿胀度。结果表明，“当飞利肝宁胶囊”20mg/kg，对大鼠足跖注射角叉菜胶引起的炎性肿胀均有明显抑制作用，与空白对照组比较有显著差异（P<0.001）。见表1

 

表1   对大鼠足跖注射角叉菜胶所致炎性肿胀的影响

剂量	动物数	致炎后不同时间肿胀度（ml,x±SD）
药物	（mg/kg ）	（只） 1h		2h		3h		4h
生理盐水	10.0	10	0.38±0.10		0.49±0.21		0.51±0.20		0.48±0.16
当飞利肝宁胶囊	20.0	10	0.05±0.04***		0.08±0.07***		0.25±0.22*		0.37±0.10
布洛芬	0.1(g)	10	0.10±0.06***		0.16±0.06***		0.24±0.08**		0.28±0.09**

t检验 与生理水比较，^*P<0.05，^**P<0.001，^***P<0.001。

2.1.2 对大鼠棉球肉芽肿的影响：取Vvistar种大鼠30只，雌雄各半，体重160g±20g，分组及剂量同上。将动物i.p戌巴比妥钠（30mg/kg）麻醉后，仰卧固定于鼠板上，在无菌操作下，下腹部稍加剥离皮下组织，用眼科镊将20mg重灭菌棉球2只植入腹部皮下，随即缝合皮肤。术后次日灌胃给药一次，连续用药7d。经8天动物脱颈椎致死后，打开切口，将棉球连同周围结缔组织一起剥出，剔除脂肪组织，置60℃烘干，称重，将所得肉芽肿重量减去棉球重量，即肉芽肿净重。计算每组动物肉芽肿毫克重/每百克体重均数和标准差，比较各组肉芽肿重量，计算抑制率，结果20mg/kg“当飞利肝宁胶囊”组对大鼠棉球肉芽肿的形成有显著的抑制作用，（P<0.01）见表2。

表2对大鼠棉球肉芽肿的影响（X±SD）

组	剂   量	例数	肉芽总重	抑制率
别	（mg/kg）	(N)	mg/100g体重	（%）
对照组	10.0	10	60.92±15.73
当飞利肝宁胶囊	20.0	10	38.45±14.74**	40.74
百蕊片	0.24（g）	10	29.72±6.81**	52.97

与对照组相比：** P<0.01

 

2.1.3对大鼠羧甲基纤维素囊中白细胞游出的影响：SD大鼠30只，雌雄各半，体重160g—180g，随机分成3组，每组10只。组别设置同上，均op给药2次，间隔4h，于给药前一天在无菌操作下向大鼠背部皮下注射入空气5mI，形成一园形气囊，给药后1h用消毒针头和注射器向囊内注入1.5%CMC液5mI，于首次给药后3h及7h吸取囊内CMC液0.1m1，精确吸取0.01m1，稀释剂0.5m1，滴于白细胞计数板上，计算白细胞数。结果20mg/kg“当飞利肝宁胶囊”组可使CMC囊中白细胞游出明显减少，与空白对照组比较有显著差异（P <0.01）见表3。

表3对大鼠羧甲基纤维素囊中白细胞游出的影响

 

药           剂 量        动物数    囊内白细胞数（10/Lx±SD）

　　　（mg/kg）     （只）

物                               3h              7h

生理盐水      5.0      10         8.0±1.1         58.8±13.4

　　当飞利肝宁胶囊 　20.0     10         3.3±2.0*       19.8±2.3*

布 洛 芬    0.1（g） 10         2.7±1.2*       13.2±6.4*

 

七检验  与生理盐水比较：P<0.001

2.1.4 对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响：取昆明种小鼠30只，雌雄各半，体重18g—22g，随机分成3组，每组10只。连续给药5d，末次给药1h后，每只小鼠左耳涂0.05 mI二甲苯致肿，右耳作正常对照，1h后处死小鼠，以左耳重量减去右耳重量为肿胀度，比较药物的抗炎作用，结果20mg/kg”当飞利肝宁胶囊”具有明显的抑制二甲苯所致耳廓肿胀的作用，与对照组相比，有显著性差异（P<0.05），见表4

表4  对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响（x±SD）

 

组   别      剂   量       例  数      肿 胀 率        抑  制  率

             （g/kg）        (N)         （%）            （%）

对 照 组      0.5 mI         10         0.88±0.47  

当飞利肝宁胶囊 20.0          10         0.53±0.23^*          40.72

百 蕊 片      0.24          10         0.50±0.24^*          44.21

与对照组相比：*P<0.05

2.1.5 对二甲苯所致小鼠耳毛细血管通透性增高的影响：取雄性小鼠30只，体重26g—30g随机分成3组，每组10只，分组及给药同上。给药后1h，小鼠经尾静脉注入0.5%伊文思蓝生理盐水0.1ml/10g并迅速将0.04mI二甲苯涂于小鼠右耳前后两面。20min后将小鼠处死，剪下右耳，用直径9mm的打孔器于各耳相同部位打下园形耳片。剪碎耳片置于10.0mI丙酮一生理盐水（7：3）提取液的有塞试管中，暗处放置，每日轻摇试管2-3次，3d后经110X g离心10min，取上清液于590nm处测吸光度。以未泡皮肤之丙酮一生理盐水提取液校零。从标准曲线上求得各耳片染料量。结果表明：20mg/kg当飞利肝宁胶囊组能明显抑制二甲苯致小鼠耳毛细管通透性增高，与空白对照组比较有显著差异（P<0.001）见表5。

 

表5对二甲苯致小鼠耳毛细血管通透性增高的影响

组          剂   量      动物数              耳片染料量

别          （ml/kg）       (只)               (M ·x±SD)

生理盐水         20.0         10                    16.5±3.1

当飞利肝宁胶囊 　20.0(mg)         10                    6.8 ±2.0*

布 洛 芬         0.1（g）     10                    4.8±2.3*

与对照组相比：*P<0.05

2.1.6 对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响：分组及剂量同上。给药1h后，给各鼠iv0.5%伊文氏蓝10ml/kg。注射后20min脱颈椎处死小鼠，以6ml生理盐水分数次洗涤腹腔，吸管吸出洗液，合并加生理盐水至10ml，离心15min，取上清液用724-IP分光光度计（a=590nm）测定光密度A值。结果显示：20mg/kg当飞利肝宁胶囊组明显抑制醋酸腹腔注射后所致的毛细血管通透性的增加，与对照组相比，具有显著的差异性，（P<0.05）见表6。

表6对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响（x±SD）

 

组   别         剂    量        例   数          光 密 度

（mg/kg）         （N）             A值

对 照 组                              10            0.321±0.091

当飞利肝宁胶囊 　　　　20.0             10             0.232±0.088^*

百 蕊 片             0.24（g）        10            0.277±0.087^*

与对照组相比： *P<0.05  

2.2 退黄作用

2.2.1 Wistar大白鼠，体重180g—220g，雌雄不拘，随机分为生理盐水对照组，ANZT中毒组，当飞利肝宁胶囊治疗组。ANZT中毒组和当飞利肝宁胶囊治疗组均先将75mg/kg的ANZT分别灌入大鼠胃内，由于大鼠经ANZT中毒后6小时肝细胞开始变性坏死，故选定12小时开始治疗用当飞利肝宁胶囊20mg/kg，ig，bid，连续给药3天。而ANZT中毒组和生理盐水对照组则补给等体积的生理盐水。3组均于中毒72小时后一起经股动脉切开放血，收集血样于室温下静置4—6小时分离血清，用咖啡因法定量测定SB，见表7。

表7血清胆红素含量的比较

组   别           动物数                    SB(mg%血清)

                  （只）                      x±SD

生理盐水组          10                       0.46±0.29

ANZT组             10                       5.34±1.05        

当飞利肝宁胶囊组            10                       3.43±1.54*    

 

*P<0.01  

结果表明，当飞利肝宁胶囊治疗组的血清胆红素显著低于ANZT中毒组（P<0.01）。治疗后，血清胆红素的含量由5.34mg降至3.43mg，平均下降36.2%。

3讨论

实验结果表明，”当飞利肝宁胶囊“对急性炎症具有抗炎作用，它能明显抑制由角叉菜胶所致的大鼠足跖炎性肿胀，也能明显抑制二甲苯致小鼠毛细血管通透性增高及大鼠羧甲基纤维素囊中白细胞游出。 这三项抗炎作用为该药用于治疗急性炎症提供了药理学依据。

实验还发现，“当飞利肝宁胶囊”可明显抑制二甲苯所致耳廓肿胀作用，抑制大鼠棉球肉芽肿胀和醋酸腹腔注射后所致毛细血管通透性的增加。表明其对急慢性炎症反应均有显著抑制能力，并有效抑制炎症阶段毛细血管的通透性，减轻渗出反应。提示“当飞利肝宁胶囊”可能对炎症的多个环节如体内的炎性介质释放，毛细血管通透性的增加，组织水肿胀，炎性渗出，以及炎症增殖期的肉芽组织增生等均有抑制作用。

“当飞利肝宁胶囊”退黄实验结果表明其显著降低血清总胆红素的含量，可能与其改善大鼠肝脏微循环，促进肝细脆的再生与恢复有关。

很多中医文献及临床观察均指出活血化瘀可增强清热解毒的治疗效果。但两者功效均具备的中成药不多，本实验结果表明“当飞利肝宁胶囊”的这两种功效在临床应用中的广泛的有效价值。

 

 

参考文献略

 

第一作者，张力群（云南省药物研究所药理室）高级工程师。

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